TOV-112D 人上皮性卵巢癌細胞

蘇州千舍生物實(shí)驗室所出售細胞，均含有STR鑒定報告，保證細胞最佳狀態(tài)發(fā)貨~~

規格： 1*10 6   

該細胞系于 1992 年 10 月從一名42歲女性患有早發(fā)性卵巢癌的患者中啟動(dòng)。該患者為法裔加拿大血統，卵巢癌家族史不明。與 TOV-21G ( ATCC CRL-11730 ) 和 OV-90 ( ATCC CRL-11732 ) 不同，TOV-112D 細胞系在染色體 3p24 處沒(méi)有缺失。

 

細胞特性

 

1） 來(lái)源：42歲 女性 卵巢癌組織

 

2） 形態(tài)：上皮樣   貼壁生長(cháng)

 

3） 含量：>1x10^6  細胞數

 

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

5）用途：僅供科研使用。

 

運輸和保存

 

干冰運輸及復蘇好存活細胞

 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

 

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

 

細胞接收后的處理

 

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

 

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

 

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的wan全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。

 

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的wan全培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。                      

 

一．培養基及培養凍存條件準備：

 

1） 準備基礎培養基是 1:1 的 MCDB 105 培養基（含最終濃度為 1.5 g/L 碳酸qing鈉）和M199 培養基（含最終濃度為 2.2 g/L 碳酸qing鈉）的混合物，優(yōu)質(zhì)胎牛血清，15%；雙抗，1%。

 

備注：該細胞生長(cháng)緩慢，培養周期在3-4周左右。

 

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

 

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

 

二． 細胞處理：

 

1） 凍存細胞的復蘇：

 

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mLwan全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，wan全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mlwan全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

 

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

 

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

 

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

 

2. 加入0.25％（w / v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。

 

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的wan全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

 

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

 

下面T25瓶為例；

 

1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml.

 

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。

 

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

 

細胞培養的原則

 

無(wú)菌原則

 

1.操作臺環(huán)境無(wú)菌：紫外線(xiàn)消毒至少30分鐘，75%酒精擦拭。

 

2.實(shí)驗材料無(wú)菌：紫外線(xiàn)照射、酒精擦拭、酒精燈、封口膜。

 

3.實(shí)驗時(shí)手部無(wú)菌。

 

4.實(shí)驗操作無(wú)菌。

 

減少細胞環(huán)境擾動(dòng)原則

 

1.培養箱內溫度恒定，進(jìn)行操作前培養基預熱。

 

2.轉移細胞時(shí)需輕拿輕放、避免震動(dòng)。

 

3.縮短細胞在培養箱外的時(shí)間，維持恒定的CO2濃度。

 

4. 槍頭吹打時(shí)要輕柔，避免細胞發(fā)生破壞。

TOV-112D 人上皮性卵巢癌細胞

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