名稱(chēng)：人正常胰腺類(lèi)器官培養基試劑盒

貨號：WS002-100-KIT/WS002-500-KIT

規格：100ml/500ml

品牌：WinSera

人正常胰腺類(lèi)器官培養基是一款促進(jìn)人正常胰腺類(lèi)器官體外形成和擴增的培養基。該產(chǎn)品為無(wú)菌的液體混合系統，含有維持目的細胞生長(cháng)所必需的氨基酸、維生素、有機和無(wú)機化合物以及生長(cháng)因子等。該培養基的du特配方可以提供一個(gè)合適的細胞所需營(yíng)養環(huán)境，促進(jìn)人正常胰腺類(lèi)器官的體外生長(cháng)和擴增。
一、試劑盒組成：

、1、原代
（1）將組織放入含有特殊組織保存液E的組織取樣瓶中，快速轉運至潔凈實(shí)驗室進(jìn)行組織處理和干細胞分離，拍照并登記信息。
（2）準備若干培養皿，加入 4℃預冷的人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B備用。
（3）取樣瓶消毒，將組織放入培養皿中，利用人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B清洗三次后，利用眼科jian或手術(shù)dao將腫瘤組織jian切成體積約為 1-3 mm3的組織塊。
（4）組織用人正常胰腺原代組織xiao化液C消化，37℃震蕩消化10-20 min，（消化過(guò)程中隨時(shí)觀(guān)察消化情況）。
（5）取少量液體在顯微鏡下觀(guān)察，鏡下觀(guān)察到較多的單個(gè)細胞或 70 um 以下的細胞簇后，加入三倍體積人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B終止消化。
（6）使用100 um孔徑的篩網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾，將濾液收集后，于300 g富集離心5 min后移去上清，添加人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B重新重懸離心。
（7）基質(zhì)膠計算：第6步后觀(guān)察收集到的組織體積，添加25倍組織體積的基質(zhì)膠（abs9495）重懸鋪板。
（8）24孔細胞培養板為例，每孔點(diǎn)膠25 ul組織基質(zhì)膠混合物進(jìn)行鋪板（4℃下操作）。
（9）將鋪好的培養板放入37℃培養箱中10-15 min成膠，添加人正常胰腺類(lèi)器官培養基A（恢復室溫）進(jìn)行培養。

2、類(lèi)器官傳代培養
（1）移液器吸去培養基，每孔添加1-2 ml 4℃類(lèi)器官緩沖液B放置2 min。
（2）移液槍輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15 ml離心管中，4℃靜置10 min。（每6-8孔為一組）
（3）A：類(lèi)器官數量不足或體積較小時(shí)： 離心5 min棄去上清，添加適量人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管，300 g離心5 min棄去液體進(jìn)行第4步。
         B：類(lèi)器官數量較多或體積較大時(shí)：離心5 min棄去上清，添加適量類(lèi)器官傳代消化液D消化2-3 min，添加人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B終止消化，離心5 min棄去混合液，添加適量人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管，300 g離心5 min棄去液體進(jìn)行第4步。
（4）類(lèi)器官收集后，添加基質(zhì)膠重懸，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養板中，放置培養箱中10-15 min添加500 ul人正常胰腺類(lèi)器官培養基A。

3、類(lèi)器官凍存
（1）移液器吸去培養基，每孔添加1-2 ml 4℃類(lèi)器官緩沖液B放置2 min。
（2）移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15 ml離心管中，4℃靜置10 min。（每6-8孔為一組）
（3）離心5 min棄去上清，添加適量人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B再次重懸，300 g離心5 min棄去液體。
（4）添加適量類(lèi)器官凍存液F，輕柔吹打重懸，以24孔細胞培養板為例：密度為2個(gè)孔凍存1管，每管體積4 ml。
（5）做好標記信息，進(jìn)行程序降溫后，移入液氮長(cháng)期保存。

4、類(lèi)器官復蘇
（1）取10 ml人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B于15 ml離心管中。
（2）從液氮罐中取出凍存的類(lèi)器官細胞，快速置于 37℃水浴鍋中融解。
（3）水浴融解過(guò)程中，需輕輕搖動(dòng)冷凍管，以確保凍存液在 1-2 min內wan全融解。
（4）將溶解后的類(lèi)器官細胞快速轉移至15 ml 離心管，使用移液管輕輕吹打6-8次，300 g離心5 min，然后除去上清液并收集類(lèi)器官細胞沉淀。添加適量人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B重懸移入5 ml離心管300 g離心5 min。
（5）基質(zhì)膠重懸，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養板中，放置培養箱中10-15 min成膠，添加500 ul人正常胰腺類(lèi)器官培養基A。
（1）將組織放入含有特殊組織保存液E的組織取樣瓶中，快速轉運至潔凈實(shí)驗室進(jìn)行組織處理和干細胞分離，拍照并登記信息。
（2）準備若干培養皿，加入 4℃預冷的人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B備用。
（3）取樣瓶消毒，將組織放入培養皿中，利用人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B清洗三次后，利用眼科jian或手術(shù)dao將腫瘤組織jian切成體積約為 1-3 mm3的組織塊。
（4）組織用人正常胰腺原代組織xiao化液C消化，37℃震蕩消化10-20 min，（消化過(guò)程中隨時(shí)觀(guān)察消化情況）。
（5）取少量液體在顯微鏡下觀(guān)察，鏡下觀(guān)察到較多的單個(gè)細胞或 70 um 以下的細胞簇后，加入三倍體積人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B終止消化。
（6）使用100 um孔徑的篩網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾，將濾液收集后，于300 g富集離心5 min后移去上清，添加人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B重新重懸離心。
（7）基質(zhì)膠計算：第6步后觀(guān)察收集到的組織體積，添加25倍組織體積的基質(zhì)膠（abs9495）重懸鋪板。
（8）24孔細胞培養板為例，每孔點(diǎn)膠25 ul組織基質(zhì)膠混合物進(jìn)行鋪板（4℃下操作）。
（9）將鋪好的培養板放入37℃培養箱中10-15 min成膠，添加人正常胰腺類(lèi)器官培養基A（恢復室溫）進(jìn)行培養。

2、類(lèi)器官傳代培養
（1）移液器吸去培養基，每孔添加1-2 ml 4℃類(lèi)器官緩沖液B放置2 min。
（2）移液槍輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15 ml離心管中，4℃靜置10 min。（每6-8孔為一組）
（3）A：類(lèi)器官數量不足或體積較小時(shí)： 離心5 min棄去上清，添加適量人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管，300 g離心5 min棄去液體進(jìn)行第4步。
         B：類(lèi)器官數量較多或體積較大時(shí)：離心5 min棄去上清，添加適量類(lèi)器官傳代消化液D消化2-3 min，添加人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B終止消化，離心5 min棄去混合液，添加適量人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管，300 g離心5 min棄去液體進(jìn)行第4步。
（4）類(lèi)器官收集后，添加基質(zhì)膠重懸，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養板中，放置培養箱中10-15 min添加500 ul人正常胰腺類(lèi)器官培養基A。

3、類(lèi)器官凍存
（1）移液器吸去培養基，每孔添加1-2 ml 4℃類(lèi)器官緩沖液B放置2 min。
（2）移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15 ml離心管中，4℃靜置10 min。（每6-8孔為一組）
（3）離心5 min棄去上清，添加適量人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B再次重懸，300 g離心5 min棄去液體。
（4）添加適量類(lèi)器官凍存液F，輕柔吹打重懸，以24孔細胞培養板為例：密度為2個(gè)孔凍存1管，每管體積4 ml。
（5）做好標記信息，進(jìn)行程序降溫后，移入液氮長(cháng)期保存。

4、類(lèi)器官復蘇
（1）取10 ml人正常胰腺類(lèi)器官培養緩沖液B于15 ml離心管中。
（2）從液氮罐中取出凍存的類(lèi)器官細胞，快速置于 37℃水浴鍋中融解。
（3）水浴融解過(guò)程中，需輕輕搖動(dòng)冷凍管，以確保凍存液在 1-2 min內全部融解。
（4）將溶解后的類(lèi)器官細胞快速轉移至15 ml 離心管，使用移液管輕輕吹打6-8次，300 g離心5 min，然后除去上清液并收集類(lèi)器官細胞沉淀。添加適量人正常胰腺類(lèi)器官緩沖液B重懸移入5 ml離心管300 g離心5 min。
（5）基質(zhì)膠重懸，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養板中，放置培養箱中10-15 min成膠，添加500 ul人正常胰腺類(lèi)器官培養基A。

三、儲存/保存方法

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