產(chǎn)品名稱(chēng)：鴨胚肝間質(zhì)細胞永生化（種屬鑒定）

規格： 5*10 5   

細胞詳述

胎肝是胚胎發(fā)育中晚期的主要造血器官，具有特殊的生物學(xué)活性。研究表明胎肝間質(zhì)細胞與骨髓間質(zhì)細胞一樣具有多向分化能力，而且能改善小鼠腎衰模型和糖尿病模型的癥狀。

該細胞通過(guò)慢病毒轉染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養基是維持培養基，不能用來(lái)培養細胞。

細胞特性

1) 細胞來(lái)源于實(shí)驗動(dòng)物正常胚胎肝組織。

2) 細胞鑒定：CD44免疫熒光染色為陽(yáng)性。

3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5) 細胞生長(cháng)方式：長(cháng)梭狀細胞，貼壁培養。

產(chǎn)品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1) 1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進(jìn)行培養，如無(wú)法立刻進(jìn)行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2) T-25培養瓶充滿(mǎn)wan全培養基后進(jìn)行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

產(chǎn)品使用

1) 本產(chǎn)品僅能用于科研

2) 本產(chǎn)品未通過(guò)直接用于活體動(dòng)物和人的審核

3) 本產(chǎn)品未通過(guò)用于活體診斷的審核

鴨胚肝間質(zhì)細胞永生化相關(guān)細胞列表

01 什么是細胞永生化？

   正常組織來(lái)源的細胞在體外培養條件下可分裂生長(cháng)，但經(jīng)過(guò)有限次數的傳代后，就會(huì )停止增殖，發(fā)生衰老和死亡，這種現象稱(chēng)之為海夫利克極限。有的細胞自發(fā)或受外界因素的影響，可以從增殖衰老危機中逃離，從而擁有無(wú)限增殖的能力，該過(guò)程稱(chēng)之為細胞永生化（cell immortalization）。

   細胞永生化是癌變的必經(jīng)途徑。

02 細胞永生化的方法？

   細胞自發(fā)永生化的幾率非常小，于人類(lèi)細胞就更為罕見(jiàn)。

   人為干涉讓細胞永生化的方法包括：放射處理、端粒酶激活、病毒基因轉染、原癌基因激活、抑癌基因抑制等。其中，聽(tīng)過(guò)慢病毒感染使細胞過(guò)表達猴腎病毒SV40 T抗原或人端粒酶逆轉錄酶hTERT基因，是常用的兩種細胞永生化的方法。

01端粒酶激活

   端粒酶是一種能延長(cháng)端粒末端的核糖核蛋白酶，由RNA和蛋白質(zhì)組成。端粒酶能以自身的RNA為模板，從端粒DNA3’-OH 末端延伸端?；蚝铣尚碌亩肆NA， 以補償細胞分裂時(shí)染色體末端的縮短，從而維持端粒的長(cháng)度，使細胞不會(huì )因端粒耗盡而出現凋亡。

   正常情況下，大多數體細胞端粒酶的表達是嚴格調控的，表達是瞬時(shí)和低水平的。在原代培養的細胞中穩定表達人端粒酶催化亞基(hTERT)基因能穩定端粒的長(cháng)度，使細胞易于永生化，因此hTERT的激活是細胞永生化的重要步驟。

   雖然激活端粒酶活性能夠使多種人和動(dòng)物的細胞永生化，但是對于有些細胞，重建端粒酶活性并不足以使細胞永生化，還需要借助癌基因法。

02癌基因法

   一些原癌基因，如Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc和Mdm2，通過(guò)基因轉染可介導目的細胞永生化。c-Myc是最早被發(fā)現的原癌基因，有許多與瘤化相關(guān)的功能區域，其轉錄表達的蛋白通過(guò)核膜進(jìn)入細胞核與端粒酶的啟動(dòng)子結合位點(diǎn)特異性結合，誘導端粒酶mRNA快速表達，直接激活端粒酶活性，促進(jìn)細胞進(jìn)入永生化。

   細胞永生化過(guò)程中，抑癌基因如p53, pRb, BRCA1, DPC4等，通過(guò)等位基因隱性作用、抑癌基因的顯性負作用等逐漸失去活性，細胞老化途徑受阻。實(shí)驗證明端粒酶的活性與抑癌基因表達產(chǎn)物的下調有相關(guān)關(guān)系，推測抑癌基因的失活協(xié)同端粒酶的激活共同參與細胞永生化進(jìn)程。

03病毒基因轉染

很多病毒感染能夠誘導細胞永生化，例如EB病毒(epstein-barr virus, EBV)、猿猴病毒40 (simian virus40, SV40)和人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV)。這些病毒感染其天然宿主細胞，能誘導細胞永生化。

   EBV能使B淋巴母細胞永生化形成淋巴母細胞樣細胞系，它是通過(guò)潛伏蛋白激活細胞因子與其受體相互作用的途徑使細胞永生的。EBV永生化B細胞的一個(gè)顯著(zhù)的特點(diǎn)是端粒酶活性的提高，這可能是導致B細胞永生的主要原因。目前，EB病毒介導的細胞永生化應用最多的是B淋巴細胞，其他細胞中的應用很少。

   SV40是簡(jiǎn)單的真核細胞病毒，SV40的T抗原片段是常用的目的片段，將其整合入靶細胞核內并表達，可導致細胞增殖活力的改變并表現出多種與腫瘤相關(guān)的轉化顯型。應用的方法包括：野生型SV40病毒共培養感染靶細胞、磷酸鈣法、電穿孔以及逆轉錄病毒載體法等。

   HPV已成功將人的包皮細胞、角化上皮以及乳腺、胰導管和口腔等的上皮細胞永生化。HPV病毒的早期表達蛋白E6和E7在細胞永生化中起決定性作用。E6和E7蛋白能夠改變細胞的終末分化，誘導細胞進(jìn)入S期，使細胞繞過(guò)正常細胞的周期檢查點(diǎn)。

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