細胞名稱(chēng)：NCI-H1975細胞 [H-1975, H1975]

描述：

Description 人非小細胞肺癌細胞NCI-H1975 [H-1975, H1975]建系于1988年7月，來(lái)源于一位不吸煙的女士。每個(gè)批次均通過(guò)本庫支原體檢測，結果為陰性。經(jīng)本庫STR檢測無(wú)誤。STR鑒定結果為：Amelogenin: X; CSF1PO: 12; D13S317: 10,13; D16S539: 9,12; D5S818: 11,12; D7S820: 8,11; THO1: 7; TPOX: 8,11; vWA: 18

動(dòng)物種別：人

性別：女

組織來(lái)源：Tissue and Cell Type 肺

形態(tài)：Morphology 上皮樣，貼壁生長(cháng)

培養基和添加劑：Complete Growth Medium and Culture Conditions 人肺癌細胞NCI-H1975 [H-1975, H1975]*培養液配方（100 ml）：

REFERENCE NCI-Navy Medical Oncology Branch Cell Line Supplement. J. Cell. Biochem. suppl. 24: 1996. Sordella R, et al. Gefitinib-sensitizing EGFR mutations in lung cancer activate anti-apoptotic pathways. Science 305: 1163-1167, 2004. PubMed: 15284455

傳代培養及其操作步驟

原代細胞培養成功以后，需要進(jìn)行分離培養，否則細胞會(huì )因生存空間不足或密度過(guò)大，營(yíng)養障礙，影響細胞生長(cháng)。細胞由原培養瓶?jì)确蛛x稀釋后傳到新的培養瓶中培養的過(guò)程稱(chēng)之為傳代培養。傳代細胞允許培養的細胞擴增(形成細胞株)，可以進(jìn)行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的最大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗材料，便于實(shí)驗。

1、操作步驟：

（1）吸掉或倒掉培養瓶?jì)扰f培養液。

（2）向瓶?jì)燃尤胍鹊鞍酌敢汉虴DTA混合液少量。以能覆蓋培養瓶底為宜。

（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消化，2~5min后把培養瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察，當發(fā)現胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化。

（4）吸出消化液，向瓶?jì)燃尤際anks液少量，輕輕轉動(dòng)培養瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養液，終止消化。

（5）使用彎頭吸管，吸取瓶?jì)扰囵B液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過(guò)猛損傷細胞。

（6）用計數板計數后，分別接種于新的培養瓶中，置CO2培養箱中進(jìn)行培養。

（7）細胞培養換液時(shí)間應根據細胞生長(cháng)的狀態(tài)和實(shí)驗要求來(lái)確定。一般2～3d后應換一次生長(cháng)液。待細胞鋪滿(mǎn)器皿底面，即可使用；也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。

2、注意事項：

（1）掌握好細胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(cháng)的消化會(huì )導致細胞脫落、損傷。

（2）掌握好消化濃度，當消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應縮短，過(guò)低時(shí)細胞消化時(shí)間相對延長(cháng)。

NCI-H1975細胞

人高轉移肺癌細胞 95-D

人肺癌細胞 A549

人肺癌細胞+RFP A549+RFP

人肺癌細胞熒光素酶標記 A549+luc

人肺癌細胞 Calu-1

人肺癌細胞 DMS 53

人非小細胞肺癌細胞 HCC827

人非小細胞肺癌細胞熒光素酶標記 HCC827+LUC

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H1299

人肺癌細胞 NCI-H1437

人經(jīng)典小細胞肺癌細胞 NCI-h1688

人肺癌細胞 NCI-H1703

人肺癌細胞 NCI-H1944

人肺癌細胞 NCI-H2126

人肺癌細胞 NCI-H2228

人肺癌細胞 NCI-H23

人肺癌細胞(淋巴結轉移) NCI-H292

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H358

人小細胞肺癌細胞 NCI-H446

人大細胞肺癌細胞 NCI-H460 [H460]

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H524

人大細胞肺癌細胞 NCI-H661[h661]

人小細胞肺癌細胞 NCI-H82

人肺癌細胞 pc-9

人小細胞肺癌 SBC-2

人小細胞肺癌細胞 SHP-77

小鼠肺癌細胞 LLC

小鼠肺癌細胞熒光素酶標記 LLC+LUC

原代培養及其操作步驟

原代分離細胞培養是指從供體內取出組織后，經(jīng)機械以及消化分離成單個(gè)細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環(huán)境，在無(wú)菌、適當溫度和一定的營(yíng)養條件下，生存、生長(cháng)和繁殖。原代培養細胞常有不同的細胞成分，生長(cháng)緩慢，但是更能代表所來(lái)源的組織細胞類(lèi)型和表達組織的特異性特征。利用原代細胞培養做各種實(shí)驗，如藥物測試、細胞分化及病毒學(xué)方面的試驗效果很好。其操作步驟如下。

1、剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用鑷去除黏附的結締組織等非培養所需組織。再次清洗后，用刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm3大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當的緩沖液再清洗一次。

2、消化分離：消化分離的目的是將細小的組織塊消化分離成細胞團或分散的單個(gè)細胞，以利于進(jìn)一步的培養，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。

3、培養：細胞懸液用計數板進(jìn)行細胞計數。用培養液將細胞數調整為（2～5）×105 cells／ml，或實(shí)驗所需密度，分裝于培養瓶中，使細胞懸液的量以覆蓋后略高于培養瓶底部為宜。置CO2培養箱內，5％CO2，37℃靜置培養。一般3～5d，原代培養細胞可以黏附于瓶壁，并伸展開(kāi)始生長(cháng)，可補加原培養液量1／2的新培養液，繼續培養2～3d后換液，一般7～14d可以長(cháng)滿(mǎn)瓶壁，進(jìn)行傳代。

4、注意事項：

1）無(wú)菌操作：細菌或霉菌污染是培養失敗的常見(jiàn)原因，必須加強各個(gè)環(huán)節的無(wú)菌操作觀(guān)念，以預防為主，一旦污染，一般很難消除。

（2）培養液：所用的培養液必須滿(mǎn)足細胞生存和生長(cháng)的必要條件。由于細胞來(lái)源的動(dòng)物種類(lèi)、組織類(lèi)型不同，對培養液的要求有一定的差異，必要時(shí)可用預實(shí)驗的方法選擇適當的培養液。

（3）小牛血清：小牛血清對于維持培養細胞的生存和促進(jìn)細胞增殖起著(zhù)關(guān)鍵性作用?？蛇x擇多種不同批號的小牛血清進(jìn)行小樣分析。一旦確定某一廠(chǎng)家的某一批號小牛血清后，就保持應用至實(shí)驗完成。

（4）膠原酶溶液：必須新鮮配制，貯存時(shí)間過(guò)長(cháng)(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導致消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，細胞損傷增加。

（5）L-谷氨酰胺：幾乎所有細胞對谷氨酰胺都有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細胞會(huì )因生長(cháng)不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中很不穩定，加有谷氨酰胺的培養液在4℃冰箱貯存兩周以上時(shí)，就應重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。

（6）靜置培養：原代細胞在消化分離后，置于CO2培養箱的頭24～48h (必要時(shí)72h)內，應處于絕對靜置狀態(tài)，切忌不時(shí)地取出培養瓶觀(guān)察生長(cháng)狀況，這將使原代分離細胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應注意。不必擔心培養液中的營(yíng)養成分會(huì )消耗光，在細胞增殖之前對營(yíng)養的要求并不大。原代培養初期僅加一薄層培養液的目的也在于有利于細胞貼壁伸展。

（7）消化時(shí)間：一般消化至肉眼尚可見(jiàn)微小組織顆粒即可，因為此時(shí)組織顆粒已經(jīng)松散，略經(jīng)吹打即成細胞團或單個(gè)細胞，過(guò)久的消化往往導致細胞損傷加重，細胞培養成活率降低。

（8）其他生長(cháng)因子：經(jīng)過(guò)以上處理，一般原代分離細胞培養均可以成功。對于少數特殊類(lèi)型細胞也可以考慮加一些特殊的生長(cháng)因子，如胰島素能促使細胞攝取葡萄糖和氨基酸。另外，內毒素、EGF、FGF等均有促有絲分裂作用，但費用較高。

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