蘇州千舍生物教你如何解決“細胞空泡化”

“細胞空泡化”在細胞培養中也是一個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題，它的出現原因有多種，實(shí)驗人員碰到往往會(huì )很頭疼。

在文章中小給列舉出了可能出現這種情況的原因，方便大家進(jìn)行分析選擇解決的方法。

一、可以引起細胞空泡化出現的原因有哪些？

1.細胞老化

原代細胞培養的過(guò)程中經(jīng)常出現這樣的情況，是有些細胞處于終末分化狀態(tài)，不會(huì )再分裂，時(shí)間長(cháng)了就會(huì )空泡化而死亡。

傳代細胞出現這種狀況比較少見(jiàn)，出現的原因一般都是因為細胞傳代次數過(guò)多，老化嚴重。

2.PH值

培養液的PH值與細胞正常所需PH值差別太大。

3.胰酶消化

 胰酶消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，會(huì )導致細胞狀態(tài)受損，有時(shí)也會(huì )出現這種情況。除此之外，還有一個(gè)大家容易忽略的問(wèn)題,在香港的一家科研機構表明如果消化細胞吹打時(shí)力度過(guò)大，產(chǎn)生太多氣泡，長(cháng)期存在也會(huì )出現這種現象。

4.自噬

細胞缺乏營(yíng)養導致饑餓誘導形成自噬也會(huì )形成空泡化，但是這種空泡在光學(xué)顯微鏡下是看不到的，只有在電鏡下才能觀(guān)察到。

5.細胞代謝

在細胞培養過(guò)程中，由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導致細胞代謝出現問(wèn)題，內質(zhì)網(wǎng)應激狀況下會(huì )出現細胞空泡化的情況。

6.污染

衣原體感染：一旦一些細胞出現空泡化，繼續培養，空泡范圍會(huì )擴大，即使傳代后也如此，出現這種情況，細胞基本無(wú)法挽救。后來(lái)檢測發(fā)現，此種細胞存在衣原體的感染。

支原體污染：支原體污染在不嚴重的時(shí)候細胞是沒(méi)有什么明顯癥狀的，而且也無(wú)法通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀(guān)察到，只有在嚴重的時(shí)候會(huì )導致細胞狀態(tài)變差，出現細胞空泡化的現象，細胞膜上也會(huì )出現小黑點(diǎn)附著(zhù)。

病毒污染：在文獻上也有說(shuō)病毒污染也會(huì )導致細胞出現空泡化的情況。

Hyclone胎牛血清SH30084.03  、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03  、Hyclone胎牛血清SH30070.03

特級胎牛血清 SH30070.03E 、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03  、活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活 SH30068.03HI 、馬血清SH30074.03  、烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03。

BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 、PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151。

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES級別胎牛血清 04-002-1A 、

BI 間充質(zhì)胎牛血清 04-400-1A 。

Corning胎牛血清 35-076-CV。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P 。

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE。

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108 、Gemini特級胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 。

TCB胎牛血清 101ZC。

Sigma 特級胎牛血清F2442 、Sigma正常人AB血清 H4522 。

SBI 無(wú)外泌體血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清盒裝A31608-02、馬血清16050-122。

雙抗15140-122、SV30010  、胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結腸癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結腸癌奧沙利鉑耐藥細胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結腸癌細胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細胞株

NCI-H1650 人肺支氣管癌細胞

RT4 人膀胱移行細胞乳頭瘤 、SK-N-MC 人神經(jīng)上皮瘤細胞

SK-N-SH 人神經(jīng)母細胞瘤細胞 、SW982 人滑膜肉瘤細胞

T98G 人膠質(zhì)母細胞瘤 、U251MG(KO) 人類(lèi)星形膠質(zhì)細胞瘤細胞

U266 人骨髓瘤細胞 、VCAP 人前列腺癌細胞

hTERT-HPNE 人胰腺導管細胞 、ES-2 人卵巢透明細胞癌細胞

NCI-H1650人非小細胞肺癌細胞 、H460 人大細胞肺癌細胞

HACAT 人永生化角質(zhì)形成細胞 、HCT116 人結腸癌細胞

HEK293 人胚腎細胞  、HEPG2 人肝癌細胞

HGC27 人胃癌細胞(未分化) 、HT-29 人結腸癌細胞

HUVEC 人臍靜脈內皮細胞 、KYSE150人食道癌細胞

L02(HL7702)人正常肝細胞   、LOVO 人結腸癌細胞

MCF-10A人正常乳腺上皮細胞 、MCF7人乳腺癌細胞

LX-2 人肝星狀細胞 、MDA-MB-468人乳腺癌細胞

二、遇到細胞空泡化我們應該如何解決？

1.如果是因為細胞老化的原因，可以通過(guò)復蘇代數靠前的細胞進(jìn)行培養。

2.如果是培養液PH的問(wèn)題，可以通過(guò)更換培養液調整到合適的PH值，再進(jìn)行培養。

3.在傳代時(shí)，要選用合適濃度的胰酶和選取適當的消化時(shí)間進(jìn)行消化，在操作時(shí)避免吹打太過(guò)用力出現太多氣泡。

4.要保證細胞培養所需的營(yíng)養充足，可以通過(guò)增加血清濃度和在培養基中加入谷氨酰氨解決。

5.盡量使用質(zhì)量好和渠道正規的胎牛血清，因為這樣的血清營(yíng)養豐富且外源刺激因子少，可以有效的避免出現這類(lèi)問(wèn)題。

6.在細胞培養時(shí)要嚴格進(jìn)行無(wú)菌操作，操作時(shí)要規范，減少污染的可能性?？梢酝ㄟ^(guò)試劑盒檢測細胞是否污染，對于已經(jīng)污染的細胞滅菌后直接處理，避免污染其他細胞。